当前位置：贝马喷膜剂的质量控制
叶玉杰1 ，舒翔2 ，刘敏2 ，唐静宜1 ，余南才2
( 1． 武汉科技大学医学院药学系，武汉 430065; 2． 武汉市第一医院药学部，武汉 430022)
摘 要 目的 研究 膜 的 量控制方法。方法 采用薄 析( TLC) 法膜 中的 鞭草 行定性
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，高效液相色 法 土 母苷甲 行定量 定。色 柱 |
Kromasil C ( 150 mm×4． 6 mm，5 |
m) ; |
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18 |
μ |
流 相 甲醇水 |
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( 65∶ 35) ; 流速 1． 0 mL·min－1 ; 波 214 nm; 柱温 室温。结果 |
薄 色 法中，供 品与 照 材色 相 的位 |
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置上，相同 色的斑点，斑点清晰、分离效果好、阴性 照无干 。土 母苷甲在 5 ～ 80 mg·L－1 范 内 性关系良好，平
均回收率 100． 20% ( RSD = 1． 92% ，n = 6) 。结论 方法操作 便、准确可控，可用于 膜 的 量控制。
关键词 膜 ; 土 母苷甲; 鞭草
中图分类号 R286; R927． 2 文献标识码 A 文章编号 1004－0781( 2013) 07－0939－03
Quality Control of Beima Spraying-film Preparation
YE Yu-jie1 ，SHU Xiang2 ，LIU Min2 ，TANG Jing-yi1 ，YU Nan-cai2 ( 1． Department of Pharmacy，Medical
College，Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430065，China; 2． Department of Pharmacy，the
First Hospital of Wuhan City，Wuhan 430022，China)
ABSTRACT Objective To study the quality control method for beima spraying-film preparation． Methods Verbenae
herba was identified by using the TLC，and the tubeimoside content was determined by using HPLC． HPLC was performed on
Kromasil C18 column ( 150 mm×4． 6 mm，5 μm) at room temperature，with the mobile phase as MeOH-H2 O( 65∶ 35) ，at the flow
rate of 1． 0 mL ·min－1 ，the wavelength as 214 nm． Results In the TLC chromatography region，the fluorescent speckles
demonstrated an identical color at corresponding positions between the samples and the control，the speckles looked clean well separated． The tubeimoside showed a good linear relationship with in the range of 5 －80 mg·L－1 ，with the average recovery of 100． 20% ( RSD = 1． 92% ，n = 6) ． Conclusion The method is simple，accurate and proven to be suitable for the quality control of beima spraying-film preparation．
KEY WORDS Beima spraying-film preparation; Tubeimoside; Verbenae herba
贝马喷膜剂是由土贝母、马鞭草、马齿苋等数味中药组方制备而成，根据临床验方开发研制的中药复方制剂，具有抗菌、抗病毒的功效。土贝母为方中君药，
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［1-2］ |
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皂苷类为土贝母中的主要活性成分，含量较大 |
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2010 年版《中华人民共和国药典》以土贝母苷中研究
［3］
较多的活性成分土贝母苷甲为标准品 。本研究将
土贝母苷甲作为定性和定量成分。马鞭草主要化学成
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［4］ |
［5］ |
，马齿苋是药食两用的植物， |
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分是苷类 |
和黄酮类 |
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研究尚不详细，目前报道比较多的是其水溶性成分和黄酮类成分。笔者在本实验拟研究该制剂的质量控制方法。
1 试药与仪器
1． 1甲醇( 色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司) ，甲醇( 分析纯，天津市科密欧化学试剂有限
收稿日期 2012－10－06 修回日期 2012－12－11
作者简介 叶玉杰( 1980－) ，男，湖北洪湖人，讲师，从事药物制剂及其质量标准研究。电话: 027 － 63452518，E-mail:
yujieye@ 126． com。
通讯作者 舒翔( 1978－) ，男，湖北英山人，中药师，从事中药制剂及其质量标准研究。电话: 027 － 65302556，E-mail:
flyingshu@ tom． com。
公司) ，95% 乙醇、三氯甲烷、正丁醇、冰醋酸、环己烷、乙醚( 均为分析纯，武汉市洪山区中南化工试剂有限公司) ; 薄层层析用硅胶 G( 化学纯，青岛海洋化工有限公司) ; 土贝母苷甲对照品( 含量＞98% ，批号: 1536-200304) ; 马鞭草对照药材( 批号: 121002-200202) ，均购自中国食品药品检定研究院; 去离子双蒸水 ( 自制) 。贝马喷膜剂样品( 武汉市第一医院药学部提供，批 号: 120501，120502，120503，120801，120802， 120803) 。
1． 2 器 高效液相色谱仪( 岛津 LC-10AT，紫外检测器) ; KQ2200 型超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) ; 恒温水浴锅( CH3006，江苏中大仪器厂) ; 电子天平( AR2130，梅特勒-托利多仪器有限公司) 。
2 方法与结果
2． 1鞭草的薄 色 取贝马喷膜剂药
液 5 mL，加水 5 mL 稀释，经乙醚脱脂 2 次，每次乙醚 10 mL; 弃去醚层，水层加三氯甲烷 10 mL 萃取 2
次，合并三氯甲烷层液，水浴挥干，残渣加甲醇溶解 1 mL，作为供试品溶液; 取马鞭草对照药材 1 g，加 70% 乙醇 5 mL，超声处理 15 min，过滤，滤液挥发至无醇味，加水 5 mL 稀释，后与供试品溶液同法处理，得对照
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Herald of Medicine Vol. 32 No. 7 July 2013 |
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药材溶液。取马鞭草的阴性样品，按供试品溶液制备 |
2． 2． 4 线性关系考察 |
精密称取土贝母苷甲对照品 |
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方法处理，作为阴性对照溶液。按薄层色谱法实验，分 |
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约 10 |
mg 置于 100 |
mL 量瓶中，加甲醇溶解，定容，摇 |
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别吸取上述 3 种溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶 G 薄 |
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匀，作为对照品储备液。分别精密吸取储备液 0． |
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层板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸( 20 ∶5 |
5，1． 0，2． 0，4． |
0，8． 0 mL，置于 10 mL 量瓶中，用甲醇稀 |
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∶8∶0． 1) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10% 硫酸 |
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释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，分别进样 10 μL，记 |
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乙醇溶液，105 加热至斑点显色清晰。供试品色谱 |
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录色谱图，测定峰面积。以进样溶液浓度( C) 与对应 |
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中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的淡蓝色 |
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峰面积 ( A) 求得回归方程: A = 286． 32C + 163． 21，r |
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的斑点，而阴性对照品中无此特征斑点。 |
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= 0． 999 5( n = 5) ，表明线性关系良好。线性范围为 5 |
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2． 2 土 母苷甲的含量 定 |
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～ 80 mg·L－1 。 |
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2． 2． 1 色谱条件 |
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色谱柱为 Kromasil C18 ( 150 mm × |
2． 2． 5 |
精密度实验 精密吸取对照品储备液 2． 0 mL |
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4． 6 mm，5 μm) ; 流动相为甲醇-水( 65 ∶35) ; 流速为 |
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置 10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。连续进样 5 |
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1． 0 mL ·min-1 ; 检测波长 214 nm; 柱温为室温，进 |
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次，每次 10 |
μL，测得土贝母苷甲峰面积的 RSD |
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样 10 μL。理论板数按土贝母苷甲峰计算应≥1 500。 |
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为 1． 2% ( n = 5) 。 |
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2． 2． 2 溶液的制备 |
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2． 2． 6 重复性实验 取同一批贝马喷膜剂样品( 批 |
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2． 2． 2． 1 对照品溶液 |
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精密称取干燥至恒重的土贝母苷 |
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号: 120801) 6 份，精密量取，按照样品溶液制备项下方 |
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甲对照品适量，加流动相制成每毫升含 50 μg 的溶液， |
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法制备样品溶液，进样测定。结果土贝母苷甲平均含 |
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即得。 |
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量为 0． 014 0 |
mg·mL－1 ，RSD = 1． 8% ( n = 6) ，表明本 |
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2． 2． 2． 2 样品溶液 |
精密吸取贝马喷膜剂药液 5． 0 mL， |
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法的重复性好。 |
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置分液漏斗中，加入纯化水 5． 0 mL 摇匀，经乙 |
2． 2． 7 稳定性实验 精密吸取样品溶液，于室温下存 |
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醚 10 mL 脱脂 2 次，弃去醚层，水层用水饱和正丁醇溶 |
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放 0，2，4，8，12，24 h 后分别进样测定，结果土贝母苷 |
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液萃取 4 次，每次 10 mL，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加 |
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甲含量的 RSD = 0． 89% ( n = 6) 。说明样品溶液在 24 h |
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甲醇溶解，移至 5 mL 量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。 |
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内稳定。 |
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2． 2． 2． 3 阴性对照溶液 按照处方比例，取缺土贝母药 |
2． 2． 8 回收率实验 取已知含量的不同批号贝马喷 |
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材的其他组分，按照制剂的制备工艺制得阴性样品，并 |
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膜剂 5 mL，共 6 份，分别加入适量的土贝母苷甲对照 |
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按上述样品溶液的制备方法处理得阴性对照溶液。 |
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品溶液，按照样品溶液的制备方法制备供试液，在上述 |
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2． 2． 3 系 适 性按上述色谱条件，分别精密 |
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色谱 条 件 下 进 样 10 |
μL |
分 析，结 果 平 均 回 收 |
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、 |
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10 μL |
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率 |
100． 20% |
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RSD |
1． 92% |
，见表 |
1。 |
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吸取对照品溶液 样品溶液和阴性对照溶液各 |
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， = |
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注入液相色谱仪，记录色谱图，见图 1。样品溶液色谱 |
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图中，在与对照品色谱图对应的位置上，有土贝母苷甲 |
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表 1 |
土贝母苷甲加样回收率实验结果 |
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的色谱峰，而阴性对照液色谱图上相应位置无干扰峰。 |
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Tab． 1 Results of recovery test on tubeimoside |
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mg，n = 6 |
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样品含量 |
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加入量 |
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实测量 |
回收率 /% |
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0． 068 1 |
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0． 075 0 |
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0． 144 9 |
102． 40 |
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0． 071 0 |
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0． 075 0 |
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0． 143 9 |
97． 20 |
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0． 064 0 |
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0． 075 0 |
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0． 138 6 |
99． 47 |
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0． 073 5 |
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0． 075 0 |
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0． 148 1 |
99． 47 |
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0． 068 3 |
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0． 075 0 |
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0． 144 8 |
102． 00 |
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0． 071 6 |
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0． 075 0 |
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0． 147 1 |
100． 67 |
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图 1 土贝母苷甲的高效液相色谱图
A． 阴性 品溶液; B． 照品溶液; C． 品溶液; 1． 土 母
苷甲
Fig． 1 HPLC Chromatograms of Tubeimoside
A． negative solution; B． reference solution; C． sample solution;1． tubeimoside
2． 2． 9 样品的含量测定 分别精密量取 3 个批号的贝马喷膜剂，按照样品溶液的制备方法平行配置样品溶液 5 份，每份进样 10 μL。见表 2。
3 讨论
皂苷类为土贝母主要活性成分，含量较大。2010
年版《中华人民共和国药典》没有提供土贝母的对照
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表 2 |
贝马喷涂剂样品中土贝母苷甲含量测定 |
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Tab． 2 Determination of tubeimoside content in beima |
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spraying-film preparation |
n = 5 |
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批号 |
平均含量 / ( mg·mL－1 ) |
RSD /% |
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120801 |
0． 014 0 |
1． 7 |
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120802 |
0． 013 6 |
1． 3 |
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120803 |
0． 013 8 |
1． 4 |
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药材，故本研究用土贝母苷中研究较多的活性成分土贝母苷甲为标准品进行定性和定量。马鞭草主要活性成分亦为苷类，用三氯甲烷和正丁醇萃取层，与对照药材比较，均有对应斑点。但正丁醇部位对应斑点不清晰，斑点很难识别，实验选择三氯甲烷层来鉴别马鞭草。马齿苋报道的检测成分较多为蛋白质类，本制剂提取工艺为水提醇沉，除掉大部分水溶性成分，薄层色谱亦检测不出制剂中的蛋白质类成分。本实验预实验检测马齿苋黄酮类成分( 酚羟基) ，但是发现此提取方
法对应斑点不清晰，阴性对照干扰严重。
实验结果表明，贝马喷膜剂中马鞭草药材定性鉴别对应斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰; 土贝母苷甲含量测定结果稳定，重复性好，证明该方法可用于贝马喷膜剂的质量控制。
参考文献
［1］ 马挺军，李军，屠鹏飞，等． 土贝母的化学成分研究［J］． 西
北植物学报，2005，25( 6) : 1163－1165．
［2］ 刘文庸，陈伟光，张卫东，等． 土贝母化学成分研究［J］． 中
国中药杂志，2004，29( 10) : 953－956．
［3］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典( 一部) ［M］． 北
京: 中国医药科技出版社，2010: 16．
［4］ 田菁，赵毅民，栾新慧． 马鞭草化学成分的研究( ) ［J］．
天然产物研究与开发，2007，19( 2) : 247－249．
［5］ KAWASHTY S A，EL-GARF I A． The flavonoid chemosy-
stematics of Egyptian Verbena species［J］． Biochem System
Ecol，2000，28( 9) : 919－921．
DOI 10． 3870 /yydb． 2013． 07． 032
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