侧柏叶

本品为拍科植物侧柏Biota orientalie（L．）Endl．的干燥嫩枝梢与叶。栽培或野生。全国大部分地区多有生产。夏、秋二季均可采收，剪下小枝，晾干。药材以叶嫩、色青绿、无碎末者为佳。

【处方用名】 侧柑叶，侧柏叶炭

【规范方法】 侧柏叶  取原药材，除去杂质，粗梗及果实，筛去灰屑。

侧柏叶炭  取净侧柏叶置锅内，用武火加热，炒至焦褐色，喷淋清水少许；灭尽火星，取出凉透。

【药典方法】  侧柏叶  除去硬梗及杂质。  

侧柏炭  取净侧柏叶，置热锅内，用武火炒至表面焦黑色、内部焦黄色，喷淋清水少许，熄灭火星，取出，晾干。

【量化方法】 侧柏叶  取原药材，除去杂质，粗梗及果实，筛去灰屑。

侧柏叶炭  取净侧柏叶，置锅底温度为200℃的锅内，不断翻动，炒时有微弱的炸裂声伴随，当产生大量浓烟，温度由122℃回升至210℃，药物外表呈焦褐色时，用时约4分半钟，出锅，灭尽火星，放凉。

药物炒用量 250g。

【成品性状】 侧柏叶  本品叶细小鳞片状，质厚，紧贴于细小扁平嫩枝上交互对生，深绿色或黄绿色，先端钝圆，质脆，易断，气清香，味微苦。

侧柏叶炭  叶紧缩于细小扁平嫩枝上交互对生而成麦穗状，多断裂约为10mm长，表面焦褐色，有光泽，气焦香。

【鉴别】

1.外观鉴别  本品多分枝，小枝扁平。叶细小鳞片状，交互对生，贴伏于枝上，深绿色或黄绿色。质脆，易折断。气清香，味苦涩、微辛。

2.显微鉴别 

粉末：绿色。①管胞多成束，纺锤形，为螺纹、具缘纹孔和单纹孔管胞。②下皮纤维壁甚厚，木化，胞腔线形，可见短线状孔沟。③表皮细胞壁略呈念珠形增厚，被角质层，角质层上布有草酸钙砂晶和小方晶。④小枝表皮细胞和叶片表皮细胞可见凹陷的气孔，保卫细胞较大，侧面观哑铃形，壁稍木化，观察的角度不同，形态各异。⑤树脂道多破碎。

3.理化鉴别 

3.1.取本品粉末约1g，加甲醇10ml，振摇数分钟，滤过，滤液加少许镁粉振摇，滴加盐酸数滴，1～2min后显红色。^[1]

3.2.取本品粉末1g，加60％乙醇25ml，回流l小时，滤过，取滤液，加盐酸镁粉少许，滤液均显红色。^[2]

3.3.取[理化鉴别]2中滤液分别点于滤纸上，晾干，喷三氯化铁试剂后均显浅绿灰色斑点。^[2]

4.光谱鉴别 

4.1.取粉末5g，乙醚脱脂后，用乙醇10ml回流提取半小时，提取液点于滤纸上，干后．喷2％三氯化铝乙醇试液，烘干，置紫外灯(365nm)下观察，显黄绿色荧光。^[1]

4.2.取[理化鉴别]2中滤液分别点于滤纸上，显淡黄色斑点，氨熏后黄色加深，254nm紫外光下观察，侧柏叶斑点呈明显的黄色荧光并保持40秒以上，直至氨气挥尽，渐变为紫蓝色；柏树叶斑点显微弱黄色，保持l～6秒钟即变为紫蓝色。^[2]

4.3.取[理化鉴别]2中滤液分别点于滤纸上，均显现淡黄色斑点，喷10％碳酸钠试液后黄色加深，254nm紫外光灯下观察斑点均显明显黄色，久置不变。^[2]

4.4.取[理化鉴别]2中滤液分别点于硅胶G板上，254nm紫外光灯下均显微弱黄色荧光斑点，喷三氯化铝试剂后，荧光稍增强。^[2]

5.薄层鉴别 

5.1.取本品粉末1g，加甲醇20ml，水浴回流提取lh，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，为供试品溶液。另取异海松酸对照品，加甲醇制成每ml含10mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品液15µl和对照品液10μ于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇(20:0.1)为展开剂，展开，取出晾干，喷以1%香兰醛浓硫酸显色剂。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点(淡蓝)。^[3]

5.2.取[理化鉴别]2中滤液点于硅腔G板上．以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5：3：1：1)作上行展开，展距13cm，254nm紫外光灯下观察斑点荧光，喷三氯化铝试剂后荧光稍增强。^[2]

5.3.取本品挥发油用石油醚稀释15倍，取此液点于硅胶G(110℃活化1小时)板上，分别用石油醚(I)，石油醚-醋酸乙酯(85：15)(Ⅱ)为展开剂作上行展开，展距13cm，用茴香醛-浓硫酸试液显色，105～110℃ 5分钟。样品分别显6个，5个斑点。

5.4.称取本品生品、炭品各5g，分别用75％乙醇50ml回流提取40分钟，滤过，滤液分别用石油醚萃取4次，每次5mI。醇层水浴蒸干，放冷。加醋酸乙酯2ml。溶解，取此液分别点于硅胶G薄层板上，用苯-醋酸乙酯-甲酸(5：4：1)展开，分别在自然光和紫外光灯下观察。生品在自然光下有7个斑点，炭品有5个斑点；紫外光灯下生品有7个斑点，炭品有3个荧光斑点。

6.紫外谱线组法鉴别^[4]

溶剂	吸收度A 上限	原试液浓度 （g/ml）	稀释倍数	测试液浓度 （g/ml）
H2O	3.0	1.0×10-1	100	1.0×10-3
EtOH	3.0	1.0×10-1	100	1.0×10-3
CHCl3	1.2	1.0×10-1	40	2.5×10-3
Pet	2.0	1.0×10-1	40	2.5×10-3

 

 

 

 

 

 

侧柏叶紫外谱线组图谱数据

最大吸收峰位值 （nm）
	276.0(sh)	328.5sh	316.75sh	276.0(sh)
	266.25(sh)	280.5(sh)	284.25(sh)	213.0
	226.25	225.5(sh)	249.25
		210.75

 

【含量测定】

1.高效液相色谱法测定侧柏叶中槲皮苷含量^[5]

1.1.色谱条件   用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.01mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇-冰醋酸（60：40：1.5）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按槲皮苷峰计算应不低于1500。

对照品溶液的制备   将槲皮苷对照品用甲醇溶解成0.5mg /ml。

供试品溶液的制备   取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇20ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法   分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定。

本品含槲皮苷（C21H20O11）不得少于0.10%。

1.2.色谱条件  色谱性：YWG-G8(20×40mm，7～9μm)；流动相：KH₂PO₄(0.01mol/L)-甲醇-冰醋酸(5：4：1.5)；检测波长：260nm；流速：0.5ml/min，柱压约2.5×10³kPa；槲皮苷的t_R=10.8min。

样品测定  取同一批样品各0.5g，精密称定，置25.0ml量瓶中，加入甲醇适量，超声振荡30分钟，甲醇加至刻度，摇匀，静置后取上清液进样5μl分析，计算， ^[6]

1.3.色谱条件  流动相：甲醇—0.5%磷酸溶液（45：55）；流速：1ml检测波长：368nm；进样量：10μl数据处理机外标法计算含量。

样品溶液制备  取本品1g，加60%甲醇50ml，分别加5%盐酸50ml，加热回流1h，放冷，过滤。用甲醇定量转入100ml容量瓶中，并稀释至刻度。用0.5µm的滤膜过滤。按色谱条件测定槲皮素含量。^[7]

对照品溶液制备  精密称取槲皮素标准品2.5mg，用甲醇溶解成0.05mg/ml。

2. 干酪素法测定侧柏叶中鞣质含量^[8]

实验条件及方法   以蒸馏水做空白，UV—265FW紫外分光光度计(岛津)于720nm处测定吸收度AΙ和AⅡ，由∆A求得侧柏叶中鞣质含量。

样品溶液制备  准确称取60℃干燥4h过40目筛的侧柏叶粉末0.25g于l00ml圆底烧瓶中，精密加入30%甲醇50ml，将烧瓶和内容物称重，水浴回流0.5h，冷却后补充溶剂至原重。离心15min，精密吸取上清液6ml，加pH5的醋酸一醋酸钠缓冲液10ml，再加30%甲醇定容至20ml.，得溶液I。精密量取溶液Ι10ml入已盛有350mg干酪素的50ml棕色容量瓶中，振荡1h，过滤，得滤液Ⅱ.各取溶液I、Ⅱ lml，各加Folion试剂5ml.再加1.5%碳酸钠溶液至刻度.摇匀.室温放置15min。

3. 紫外分光光度法测总黄酮含量^[3]

实验条件   415nm波长处扫描测定吸收度。

对照品溶液制备  精密称取芦丁用50%乙醇溶解成60μg/ml溶液。准确加入0.1M三氯化铝溶液3ml和1M醋酸钾溶液4ml，摇匀，并随行空白对照放置40min反应完全。

样品溶液制备   精密称取过40目筛并于60℃恒温烘4h的本品1g于50ml烧瓶中，加50%乙醇25ml，称重，水浴回流4h，补充溶剂至原重量，离心，精密吸取上清液3ml，蒸干，热水溶解并稀释至20ml，离心，精密吸取稀释液3ml，准确加人0.1M三氯化铝溶液3ml和1M醋酸钾溶液4ml，摇匀，并随行空白对照放置40min反应完全，于415nm波长处扫描测定吸收度。 计算总黄酮含量。

4. 比色法测定侧柏叶中总黄酮成分含量^[9]

实验条件及方法  用1221型分光光度计于425nm测定总黄酮吸光度

供试品溶液制备  取供试品粗粉约1g，精密称定，滤纸包裹后置索氏提取器中，加石油醚（30℃-60℃)60ml，加热回流4h，弃去石油醚液;取出滤纸包，挥干石油醚，置三角瓶中，加50%甲醇置水浴上加热回流提取3次，每次加甲醇40ml，提取时间分别为2h，1h，1h，滤过，并滤液，挥干溶剂;残渣加甲醇溶解，过滤，定容至200ml，摇匀，作为供试品溶液。

对照品溶液制备  取槲皮苷对照品，用甲醇制成70µg/ml。

5．薄层扫描法测定侧柏叶中异海松酸的含量^[10]. 

扫描条件  测定波长λS=560nm,参比波长λR=660nm,X=13mm, Y=15mm, SX=3,狭缝0.4mm×0.4mm

层析条件   硅胶G、0.3%羧甲基纤维素钠、10%氢氧化钠水溶液(7∶18∶2) 展开剂:氯仿-甲醇(100∶0.5);显色剂:2%香草醛浓硫酸,105℃烘箱显色10min，显色后覆盖玻璃板。

  对照品溶液的制备   精密称取异海松酸对照品，配成1.8mg/ml的氯仿溶液，即得。

供试品溶液的制备   精密称取过40目筛的侧柏叶粉末5.00g,置烧瓶中加100ml95%乙醇置水浴锅上保持微沸2小时，过滤，洗涤滤纸，残渣加100ml95%乙醇回流提取1h，过滤,合并滤液,蒸干,再用95%乙醇转移至5ml量瓶中,定容。

【性味与归经】  苦、涩，寒。归肺、肝、脾经。

【功能与主治】  凉血止血，生发乌发。用于吐血衄血，咯血，便血，崩漏下血，血热脱发，须发早白。

【用法与用量】  6～12g；外用适量。  

【贮藏】  置干燥处。

参考文献

[1] 郑宏钧.现代中药材鉴别手册 [M].中国医药科技出版社,第一版,2001:494.

[2] 苗明三.现代实用中药质量控制技术 [M].第一版2000：663～664.

[3] 程立方,田樱,何慧. 侧柏叶药材质量标准的实验研究[J].中国药房,1995，6(03):10.

[4] 袁久荣.中药鉴别紫外谱线组法及应用 [M]. 人民卫生出版社,1999,12.第一版:257.

[5] 中华人民共和国卫生部药典委员会.《中华人民共和国药典2000年版一部》[M] .北京,化学工业出版社,2000:173.

[6] 孙文基,沙振方,吴静. 侧柏叶中槲皮苷的HPLC测定 [J]. 药学学报,1987,22（5）:385.

[7] 仲英,孙立立.不同产地侧柏叶中槲皮素的含量测定[J]. 中国中医药科技 1999，6(04): 241.

[8] 程立方,田樱.干酪素法测定侧柏叶中鞣质含量 [J]. 时珍国医国药,1995,6(03): 13.

[9] 张国琴,刘延红,潘田琅. 侧柏叶中总黄酮成分含量测定[J].西北药学杂志, 2001,16(03):107.

[10] 程立方,崔秀君,高永建.薄层扫描法测定侧柏叶中异海松酸的含量 [J]. 时珍国医国药,2004,15(2):81.