易艳东,马威, 黄浩 , 付雷, 林世和, 余南才 (武汉市

 

第一医院实验中心, 湖北武汉 430022)

 

[  摘要]  目的:建立高效液相色谱法测定清脉颗粒中薯蓣皂

 

苷元的含量。 方法:色谱柱为 A gilent Z orbax C18 色谱柱(250

 

mm×4 .6 mm , 5 μm), 柱前加保护柱。 流动相:乙腈-水(93

 

7), 流速:1.4 m L·min-1 , 检测波长为 203 nm  , 柱温为 30

 

℃。 结果:薯蓣皂苷元进样量在4 .44 ～ 22.2 μg 范围内与峰

 

面积呈良好的线性关系 (r =0 .999 3);平均回收率为

 

96 .79 .70%(RSD 为1 .34%, n =6)。 结论:本方法简单、准

 

确 , 可用于清脉颗粒的质量控制和评价。

 

[  关键词]  清脉颗粒;薯蓣皂苷元;高效液相色谱法;含量测

 

定

 

[ 中图分类号] R927 .2 [ 文献标识码] A [ 文章编号] 1001-5213(2010)05-0418-02

 

清脉颗粒为我院经验方剂, 由白英、白花蛇舌草、蛇莓、徐长卿、丹皮、甘草等中药组成, 具有清热利湿、解毒消肿、散淤止痛之功效, 用于周围血管疾病, 特别是对治疗血栓闭塞性脉管炎有较好的疗效。 制剂中君药白英具有清热解毒、祛风除湿等功效, 薯蓣皂苷元是其分离所得有效成分, 具有溶血、降血脂、抗菌、消炎、恢复病变组织等作用[ 1] 。 因而建立了薯蓣皂苷元的高效液相色谱法并测定了其在制剂中的含

 

量 , 旨在为清脉颗粒的产品质量和临床用药的有效性提供实验依据。

 

1  材料

 

Va rian 高效液相色谱仪(美国);清脉颗粒(由本实验中心提供, 批号 080506 , 080515, 080604);薯蓣皂苷元(中国药品生物制品检定所, 批号 111539-20000001);乙腈为色谱纯,水为纯化水, 其余试剂为分析纯。

 

2       方法与结果

 

2 .1  色谱条件 色谱柱:A gilent Zo rbax C18 色谱柱(250 mm

 

×4.6 mm , 5 μm), 柱前加保护柱;柱温:30 ℃, 乙腈-水(93

 

7)为流动相;流速:1.4 mL·min -1 ;检测波长:203 nm ;理论板数按薯蓣皂苷元峰计算应不低于3 000。 在本实验条件

 

下 , 薯蓣皂苷元与同杂质峰的分离度大于1 .5, 且阴性样品溶

 

液在相应保留时间无干扰。 色谱图见图 1 。

 

2 .2  溶液的制备

 

2 .2.1 对照品溶液 精密称取 105 ℃干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品适量, 加乙腈溶解并稀释制成 1 m L 含1 .11 mg 的溶液, 即得对照品溶液。

 

2 .2.2 样品溶液 精密称取本品 5 g , 至 250 mL 锥形瓶中,加入水 13 mL , 甲醇 70 m L , 再加盐酸溶液 17 mL , 水浴加热回流1.5 h , 冷却, 滤过, 取续滤液 50 mL , 用等体积石油醚(60

 

 

～90 ℃)萃取 4 次, 分取石油醚层, 回收石油醚至干, 用适量乙腈溶解转移至 5 mL 量瓶中, 稀释至刻度, 滤过(0 .45 μm), 即得。

 

 

 

 

 

 

 

 

图 1   高效液相色谱图

 

A .对照品;B .阴性对照;C .样品

 

Fig 1   H PLC ch romatogram

 

A .reference substance ;B.negative ;C .sample

 

2 .2.3 阴性对照溶液 取缺白英的阴性药材按样品溶液的制备项下制备, 即得。

 

2 .3 线性关系考察 吸取薯蓣皂苷元对照品溶液配制成质量浓度依次为0.222, 0 .444 , 0 .666 , 0.888, 1 .11 g·L ^-1 的系列标准溶液, 进样 20 μL , 按上述色谱条件测定, 记录峰面积,以薯蓣皂苷元的进样量(μg)为横坐标, 测得的峰面积为纵坐标作图, 绘制标准曲线, 计算得回归方程:A =367 .93 X + 740 .4(r=0 .999 3)。

 

结果表明:薯蓣皂苷元进样量在4 .44～ 22.2 μg 范围内,呈良好的线性关系。

 

2 .4    精密度试验 精密吸取同一对照品溶液, 连续进样 5

 

次 , 测定薯蓣皂苷元峰面积值, 计算得其 RSD 为0 .02%, 表

 

明本方法精密度良好。

 

2 .5  稳定性试验 取同一供试品溶液, 在不同的时间内测

 

定薯蓣皂苷元峰面积, 并计算得含量 RSD 为1 .63 %, 结果见表 3。 结果表明在 8 h 内有较好的稳定性。

 

2 .6  回收率试验 精密称取本品 5 g , 共 6 份, 分别加入薯

 

蓣皂苷元对照品, 按样品溶液的制备方法制备, 依法测定, 记录色谱图, 并计算薯蓣皂苷元的回收率, 结果见表 1 。

 

表 1  回收率试验

 

T ab 1   Results of reco very ex periment

 

取样量 样品含量 加入量			测得量	回收率	平均回	RSD/ %
/ g	/ mg	/ mg	/ mg	/ %	收率/%
2 .4899	2 .3654  2 .3655		4 .6202	95 .32
2 .5002	2 .3752  2 .3750		4 .7065	98 .16
2 .5000	2 .3750  2 .3750		4 .6875	97 .37	96 .79	1 .34
2 .4998	2 .3748	2 .3748	4 .7088	98 .28
2 .5005	2 .3755	2 .3755	4 .6512	95 .80
2 .4956	2 .3708	2 .3708	4 .6433	95 .85

 

2 .7    重复性试验 取本品(批号 080506)5 g , 精密称定 5

 

份 , 分别置 250 mL 锥形瓶中, 按样品溶液的制备方法制备,依法测定, 记录色谱图, 并计算含量, 结果表明本法重复性

 

好, 见表 2 。

 

2 .8 样品测定 取本品(3 批)5 g , 精密称定, 分别置 250 mL 锥形瓶中, 按样品溶液的制备方法制备, 依法测定, 记录色谱图, 依外标法计算薯蓣皂苷元的含量, 结果见表 3 。

 

3  讨论

 

在进行样品前处理时, 本实验曾先用甲醇提取至无色,

 

 

[ 基金项目] 湖北省科技攻关计划(编号:2007AA 301B09) [ 作者简介] 易艳东, 女, 硕士, 药师, 电话:027-85332366 , E-mail :yan don g y @163 .

 

com  [ 通讯作者] 余南才, 男, 学士, 主任药师, 电话:027-85332368 , E-m ail :yu nan cai2005 @yahoo .com .cn

中国医院药学杂志 2010 年第 30 卷第 5 期 Chin H osp Pharm J , 2010 M ar , Vol 30 , No .05	· 419 ·